Оценка выживаемости прихотливых бактерий при использовании двух транспортных систем для взятия проб тампоном
11.03.2012
Сьюзен Силберт (Suzane Silbert), Карли Ромеро (Carly Romero), Майкл Мео (Michael Meo), Рэй Вайден
Cпециализированная лаборатория, клиническая больница Тампа (Esoteric Testing Lab, Tampa General Hospital), г. Тампа, Флорида, США
Резюме
Резюме
Для взятия проб и их транспортировки в клиническую лабораторию часто используют тампоны. Однако зачастую их относят к менее предпочтительным инструментам взятия проб. В последние годы были разработаны новые конструкции систем для взятия проб тампоном, что позволило улучшить абсорбцию образцов и в то же время улучшить свободное элюирование микроорганизмов в жидкую транспортную среду. Это, в свою очередь, способствует повышению чувствительности последующей процедуры анализа. Целью настоящего исследования была оценка двух новых систем для взятия проб тампоном (ESwab Transport System, компания Copan, США) и Sigma Transwab System, компания MW&E, Великобритания) для транспортировки и поддержания жизнеспособности прихотливых бактерий. В обеих системах использовалась жидкая среда Эймса. Методы: после инкубации при комнатной температуре (25ºC) и охлаждения (4ºC) оценивалась жизнеспособность следующих штаммов микроорганизмов: Streptococcus pyogenes: ATCC 19615, N. gonorrhoeae: ATCC 43069, H. influenza: ATCC 10211, S. pneumonia: ATCC 6305, P. anaerobius: ATCC 27337 и F. nucleatum: ATCC 25586. Элюирование каждого штамма проводилась вихревым методом (CLSI M40-A) с использованием суспензии с показателем мутности 0,5 по МакФарланду, с последующим разведением в соотношении 1:10. Суспензию каждого из микроорганизмов в объеме 100 мкл инокулировали на поверхность тампонов в трех повторностях, после чего хранили при температурах 25ºC и 4ºC в течение следующих временных отрезков: «0 часов», «24 часа» и «48 часов». Выживаемость бактерий оценивалась после 48-часовой инкубации при температуре 35ºC.
Результаты: Рассчитывалось среднее значение для каждого разведения бактериальной культуры. Во временной точке 0 часов результаты посева обоими типами тампонов не различались. Однако во временных точках 24 часа и 48 часов показатели высеваемости после посева тампонов Sigma Swab были ниже в сравнении с аналогичными результатами для ESwab. Обе системы для взятия проб тампоном поддерживали жизнеспособность бактерий в течение 48 часов при температуре 4ºC; сохранялась и жизнеспособность обоих штаммов Streptococcus, хранившихся при температуре 25ºC. Ни одна из систем не поддерживала жизнеспособность микроорганизмов N. gonorrhoeae, P. anaerobius и F. nucleatum во временной точке «48 часов» при температуре 25ºC, и только система ESwab поддерживала жизнеспособность этих видов во временной точке «24 часа» при температуре 25ºC. Система ESwab позволяла сохранить жизнеспособность H. influenzae при температуре 25ºC во временной точке «48 часов», а система ESwab — только во временной точке «24 часа». Выводы: жизнеспособность исследуемых бактерий сохранялась дольше при использовании системы ESwab, чем при использовании системы Sigma Swab. Таким образом, можно заключить, что система Copan ESwab превосходит систему Sigma Swab в способности поддержания жизнеспособности прихотливых бактерий при их транспортировке и хранении в условиях комнатной температуры.
Результаты: Рассчитывалось среднее значение для каждого разведения бактериальной культуры. Во временной точке 0 часов результаты посева обоими типами тампонов не различались. Однако во временных точках 24 часа и 48 часов показатели высеваемости после посева тампонов Sigma Swab были ниже в сравнении с аналогичными результатами для ESwab. Обе системы для взятия проб тампоном поддерживали жизнеспособность бактерий в течение 48 часов при температуре 4ºC; сохранялась и жизнеспособность обоих штаммов Streptococcus, хранившихся при температуре 25ºC. Ни одна из систем не поддерживала жизнеспособность микроорганизмов N. gonorrhoeae, P. anaerobius и F. nucleatum во временной точке «48 часов» при температуре 25ºC, и только система ESwab поддерживала жизнеспособность этих видов во временной точке «24 часа» при температуре 25ºC. Система ESwab позволяла сохранить жизнеспособность H. influenzae при температуре 25ºC во временной точке «48 часов», а система ESwab — только во временной точке «24 часа». Выводы: жизнеспособность исследуемых бактерий сохранялась дольше при использовании системы ESwab, чем при использовании системы Sigma Swab. Таким образом, можно заключить, что система Copan ESwab превосходит систему Sigma Swab в способности поддержания жизнеспособности прихотливых бактерий при их транспортировке и хранении в условиях комнатной температуры.
Вступление
В последние годы были разработаны новые системы для взятия проб тампоном, чтобы улучшить абсорбцию образца и, в то же время, оптимизировать высвобождение микроорганизмов в жидкую транспортную среду, что позволяет повысить чувствительность последующих процедур анализа. Примерами таких новых транспортных систем для взятия проб тампоном являются ESwab Transport System (компания Copan, США) и Sigma Transwab System (компания MW&E, Великобритания), при этом в обеих системах используется жидкая среда Эймса. Транспортная система ESwab Transport System (элюирующая) — это новая система для взятия бактериологических проб тампоном, в которой используется жидкая транспортная среда. В отличие от традиционных волоконных раневых тампонов, флокированные нейлоновые тампоны Copan имеют лучшие показатели абсорбции и элюирования образца. Весь объем взятой пробы немедленно высвобождается при контакте с транспортной средой системы ESwab, при этом у пользователя не возникает необходимости обжимать или вращать тампон, а также выполнять им помешивающие движения. Система Sigma Transwab System (Σ-Swab®) — новое устройство для взятия проб, в котором используется пробирка с завинчивающейся крышкой и жидкая транспортная среда. Образцы собирают при помощи Σ-Swab®, открыто-ячеистого полиуретанового губкообразного тампона, строение которого способствует свободному проникновению среды, содержащей микроорганизмы. После того, как проба помещается в пробирку с жидкой средой, микроорганизмы, содержащиеся в пробе, равномерно распределяются в транспортной среде, формируя готовую к использованию суспензию.
Цель: сравнить эффективность двух новых систем для взятия проб тампоном для транспортировки и поддержания жизнеспособности прихотливых бактерий. Сравниваемые системы: ESwab Transport System (Copan, США) и Σ-Swab® (Sigma) Transwab System (MW&E, Великобритания).
Метод вихревого элюирования
Была приготовлена суспензия 18–24-часовой культуры каждого микроорганизма в физиологическом растворе (0,85%-м) с показателем мутности 0,5 по МакФарланду. Суспензию мутностью 0,5 развели физиологическим раствором в отношении 1:10.
100 мкл взвеси каждого микроорганизма было перенесено в лунку титрационного микропланшета при помощи волюметрической пипетки.
Анализ выполнялся троекратно с использованием каждой из систем и лотов во временных точках «0 часов», «24 часа» и «48 часов»; каждый тампон на 10 секунд помещали вращением в 100 мкл суспензии до полной абсорбции посевного материала, после чего помещали в транспортную систему и в течение соответствующего периода времени хранили при комнатной температуре (25ºC).
Первую серию посевов (временная точка 0 часов) выполняли через 15 минут.
После выдерживания в течение соответствующего времени все тампоны опускали в пробирку, содержащую 1 мл стерильного физиологического раствора, и на 15 секунд помещали в вихревую мешалку. С использованием физиологического раствора готовили серию разведений (10-1 и 10-2).
После перемешивания в пробирке с помощью вихревой мешалки, 10 мкл каждой суспензии высевали на агаровую среду, специфичную для каждого из исследуемых микроорганизмов. Культуры готовили в двух экземплярах и инкубировали при температуре 35ºC в течение 48 часов.
После этого выполнялся подсчет. Средние показатели временных точек 24 часа и 48 часов сравнивали с показателями временной точки 0 часов по каждому разведению и виду микроорганизма.
.jpg)
Выводы:
Во временной точке «0 часов» высеваемость обоими типами тампонов не различалась. Однако во временных точках «24 часа» и «48 часов» показатели высеваемости после посева тампонов Sigma Swab были ниже в сравнении с аналогичными результатами для ESwab.
Обе системы для взятия проб тампоном поддерживали жизнеспособность бактерий в течение 48 часов при температуре 4ºC; сохранялась и жизнеспособность обоих штаммов Streptococcus, хранившихся при температуре 25ºC. Однако во временных точках «24 часа» и «48 часов» показатели высеваемости были более низкими в сравнении с аналогичными показателями при использовании системы ESwab.
При использовании системы Copan ESwab были продемонстрированы более высокие показатели выживаемости бактерий, чем при использовании системы Sigma Swab.
Таким образом, можно заключить, что система Copan ESwab превосходит систему Sigma Swab по способности поддерживать жизнеспособности прихотливых бактерий при их транспортировке и хранении при комнатной температуре.
Обе системы для взятия проб тампоном поддерживали жизнеспособность бактерий в течение 48 часов при температуре 4ºC; сохранялась и жизнеспособность обоих штаммов Streptococcus, хранившихся при температуре 25ºC. Однако во временных точках «24 часа» и «48 часов» показатели высеваемости были более низкими в сравнении с аналогичными показателями при использовании системы ESwab.
При использовании системы Copan ESwab были продемонстрированы более высокие показатели выживаемости бактерий, чем при использовании системы Sigma Swab.
Таким образом, можно заключить, что система Copan ESwab превосходит систему Sigma Swab по способности поддерживать жизнеспособности прихотливых бактерий при их транспортировке и хранении при комнатной температуре.
