Эскулиновый бульон с азидом и канамицином

Эскулиновый бульон с азидом и канамицином 

Kanamycin Esculin Azide Broth (KAA Broth)

Назначение

Жидкая среда для первичного определения стрептококков группы Д в пищевых образцах, согласно Mossel.

Описание

Презумптивный бульон KAA – это среда, рекомендованная некоторыми организациями и учреждениями для выявления, подсчета и выделения стрептококков серологической группы D по Lancefield в образцах пищевых  продуктов и напитков, напр., в ботулированной воде, свежем/охлажденном/замороженном/рубленом мясе, рыбе, моллюсках, безалкогольных напитках, выпечке и специях. Канамицин и азид натрия являются селективными ингибиторами.

Приготовление

Добавить 33 г порошка в 1 л дистиллированной воды. Разлить в соответствующие флаконы или пробирки и стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. 

Техника посева

Готовят пробирки с 9 мл бульона и чашки Петри с агаром. Делают 10-кратные серийные разведения образца в двух повторностях и вносят по 1 мл в пробирки. Инкубируют при температуре 37°C в течение 24 часов. На возможное присутствие стрептококков указывает образование черно-коричневого окрашивания и исчезновение флуоресценции под лампой Вуда. Эти пробирки считаются положительными, и из них отбирают аликвоты по 0,1 мл для инокуляции поверхности чашек с агаром KAA с помощью петли Дригальского. Чашки инкубируют в перевернутом положении при температуре 37°C в течение 24 часов. Колонии, окруженные  черным ореолом, считаются стрептококками группы D и выделяются для проведения биохимических и морфологических подтверждающих тестов, а именно, микроскопического исследования; каталазного теста (он должен быть отрицательным) в среде без азида; рост при температуре 45°C и резистентность к высоким концентрациям соли [ 6,5% NaCI в бульоне BHI (Артикул 02-599)]. Наконец, они должны расти на желчно-эскулиновом агаре (Артикул 01-265), образуя колонии того же вида, что и на KAA. Тем не менее, есть некоторые исключения из этого правила, а именно, Streptococcus equinus и S. bovis  не растут на гиперсолевом бульоне, поэтому должна быть проведена окончательная идентификация серологическими методами.

Данная методология не позволяет производить подсчет бактерий из исходного образца, и, если это необходимо, рекомендуется применить метод наиболее вероятного числа (НВЧ) на двойном бульоне KAA (Артикул 02-263). Для анализа ботулированной воды и моллюсков CeNAN (Centro National de Alimentatidn у Nutritidn, Испания) предлагает следующую технику посева:

Готовят пробирки с бульоном в нормальной и двойной концентрации.

С помощью стерильной пипетки инокулируют по 10 мл образца в пять пробирок с бульоном двойной концентрации.

Инокулируют по 1 мл образца в пять пробирок с бульоном нормальной концентрации и по  0,1 мл  образца  в пять пробирок с бульоном нормальной концентрации. Хорошо гомогенизируют и инкубируют при температуре 37°C в течение 48 часов. Пробирки с черно-коричневым окрашиванием после инкубации считаются положительными. Производят подсчет по таблицам НВЧ.

Хранение

Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)

Контроль качества

Температура инкубации:  35°C ± 2,0

Время инкубации: 24-48 часов

Инокуляция: 10-100 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность)(ISO/TS 11133-1/2)

Левая: Неинокулированная пробирка (контроль)

Правая:Enterococcus faecalis ATCC 29212

Информация для заказа:

Артикул	Упаковка
02-263-500	500 г
064-TA0197	20 пробирок по 9 мл