Основа модифицированного агара с дезоксихолатом, цефоперазоном и углем

Основа модифицированного агара с дезоксихолатом, цефоперазоном и углем 

Charcoal Cefoperazone Deoxycholate (CCD) Modified Agar Base      

Также известно, как mCCDA

Назначение

Селективная среда, применяемая для детекции и подсчета Кампилобактерий, согласно стандарту ISO10272-1:2006.

Описание

Модифицированный агар CCD разработан по стандарту ISO 10272-1:2006 и предназначен для выявления и количественного определения Campylobacter в пищевых продуктах и кормах для животных.

После того как было установлено, что кампилобактерии лучше всего растут на агаризованном питательном бульоне No. 2, другие авторы  (1983) исследовали вопрос о возможных альтернативах крови для нейтрализации токсического действия кислорода. Комбинация 0,4% угля,  0,25% сульфата железа и 0,25% пирувата натрия оказалось оптимальной.

В последующей работе исследовали подавляющий эффект некоторых ингибиторов на нежелательные микроорганизмы. Эти исследования показали, что наиболее эффективными ингибиторами являются  дезоксихолат и цефазолин. Позднее, в 1984 г., Hutchinson и Bolton заменили цефазолин (10 мг/л) на цефоперазон (32 мг/л). Это обеспечивает подавление роста контаминантов и позволяет использовать модифицированную среду (модифицированный агар CCD или mCCDA) при температуре 37°C. Амфотерицин В необходим для предотвращения избыточного роста дрожжей, способных расти при температуре 37°C, но не при  42°C.

В 1993 г. Aspinall с соавт. разработали модификацию среды mCCDA для выделения С. upsaliensis  и других термофильных кампилобактерий при температуре 37°C. Эта среда содержит 8 мг/л цефоперазона и 4 мг/л тейкопланина вместо 32 мг/л цефоперазона в mCCDA.

Антимикробный спектр тейкопланина похож на спектр действия ванкомицина, активного преимущественно в отношении грамположительных бактерий. По сравнению с mCCDA, при использовании окончательной рецептуры этой среды (агар CAT) из фекалий выделяется такое же количество Campylobacter (помимо С. upsaliensis), а для выделения С. upsaliensis  агар САТ превосходит среду mCCDA, но рост сопутствующей микрофлоры несколько усилен.

Приготовление

Развести 24,2 г порошка в 500 мл дистиллированной воды и вскипятить до растворения. Стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Остудить до 47-50°C и асептически добавить 1 флакон селективной добавки Campylobacter CCDA (Артикул 06-133-LYO). Хорошо перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Примечание: Если чашки приготовлены заранее, их следует хранить не более 4 часов при комнатной температуре или не более 7 дней в темноте при температуре 3±2°C.

Техника посева

Непосредственно перед использованием тщательно высушивают агаровые чашки, предпочтительно со снятыми крышками и поверхностью агара вниз, в сушильном шкафу до исчезновения с поверхности агара видимой влаги (не более 30 минут).

Культурой, полученной на бульоне для обогащения (бульон Болтона, Артикул 02-688), инокулируют mCCDA стерильной петлей. Инкубируют чашки при температуре 41,5°C в микроаэробных условиях (приблизительно 5% O₂, 10% CO₂ и 85% N₂ или Н₂), в течение 44 ± 4 часов.

- Шт. Campylobacter jejuni образуют серые, почти плоские и иногда распространяющиеся колонии с возможным зеленоватым оттенком и/или металлическим блеском.

- Шт.Campylobacter coli дают кремово-серый, влажный рост и часто образуют отдельные колонии.

- Шт. Campylobacter lariболее разнообразны и образуют колонии обоих морфологических типов.

- Иногда на этой среде могут вырастать случайные контаминирующие микроорганизмы: резистентные к цефоперазону виды Pseudomonas (Enterobacteriaceae) и некоторые стрептококки и дрожжи.

Необходимые добавки

Селективная добавка Campylobacter CCDA (Артикул 06-133-LYO)

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Хранение

Среда предназначена только для использования в лабораториях. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности  <60%)

Контроль качества

Температура инкубации: 42°C ± 2,0

Время инкубации: 24-48 часов

Инокуляция: 10-100 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность). Метод посева: спиральный (ISO1113-1/2).

Информация для заказа:

Артикул	Упаковка
01-685-500	500 г
064-PA0009	20 чашек Ø 90 мм
06-133LYO1	Селективная добавка Campylobacter, 10 флаконов