Основа GC агара

Основа GC агара

GC Agar Base

Назначение

Основа плотной среды, специально рекомендованная для выделения и культивирования прихотливых микроорганизмов.

Описание

Основу можно использовать следующим образом:

Шоколадный агар

Готовят из агаровой основы и гемоглобина без добавления ингибитора. Если нужно, добавляют дефибринированную кровь (1:10, т.е. 10 мл крови на  100 мл основы), охлаждают до 45°C. Ставят готовую среду на несколько секунд в кипящую баню, три раза подряд; среда приобретает цвет темного шоколада. Эта среда поддерживает рост очень капризных микроорганизмов, таких, например, как Haemophilus influenzae.

Агар Тайера-Мартина

В 1966 г. Thayer и Martin описали очень эффективную среды для выделения некоторых возбудителей, напр., нейссерий. Среду готовят из агаровой основы GC, гемоглобина и ингибирующей селективной добавки VCNT (Артикул 06-142-LYO), которая содержит антибиотики: ванкомицин и колистин для подавления оксидазоположительных контаминантов; нистатин для предотвращения роста грибов-сапрофитов и триметоприм для предотвращения избыточного роста протеев, как показали Odegaard и Phillips в1970 г. Поврежденные клетки лучше восстанавливаются, если добавить в среду стимулирующую добавку GPS-Growth (Артикул 06-144-LYO).

Агар Трансгроу

Эта среда очень эффективна для хранения, транспортировки и культивирования нейссерий. Среду готовят так же, как и агар Тайера-Мартина, но она разливается по герметично закрытым пробиркам и застывает в горизонтальном положении.

Приготовление

Развести 24.8 г порошка в 250 мл дистиллированной воды и вскипятить. Разлить в соответствующие флаконы или пробиркии стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС.

Развести 5 г сухого гемоглобина в 250 мл горячей дистиллированной воды, постоянно помешивая, гомогенизируйте раствор. Стерилизуйте автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС.

Остудите флаконы до 50°C и асептически добавьте стерильный раствор гемоглобина в основу питательной среды. Для облегчения детекции нейссерий добавьте флакон Селективной добавки VCAT (Артикул 06-141-LYO), в соответствии с инструкцией. Хорошо смешайте без образования пузырьков и разлейте среду по чашкам.

Техника посева

Если взятие образцов производится недалеко от лаборатории, их можно засевать непосредственно на чашки со средой Тайера-Мартина. Если предстоит транспортировка в лабораторию, предпочтительно использовать среду Трансгроу.

Тест на гонококковую инфекцию:

У женщин образцы рекомендуется брать следующим образом:

По возможности, из шейки, после удаления цервикального слизистого секрета.

Если цервикальный посев не дает роста, можно сделать посев из прямой кишки.

Если не представляется возможным взять цервикальную пробу, напр., у девочек  или после гистерэктомии, можно посеять вагинальные или уретральные образцы.

У мужчин рекомендуется делать посев из слизистой уретры. Также возможен посев анальных и фарингеальных образцов.

Для диагностики гонореи у женщин необходимо получить рост грамотрицательных  кокков со специфической морфологией в сочетании с положительной  оксидазной реакцией. Однако при диагностическом исследовании мужчин достаточно показать присутствие внутриклеточных гонококков в уретральном экссудате. Посев для биохимической идентификации необходим, если нет возможности провести первый тест. В особых случаях можно доказать присутствие Neisseria gonorreheae в реакциях с флуоресцирующими антителами. Мазки уретральных экссудатов для микроскопического исследования следует готовить с осторожностью, чтобы сохранить клеточную морфологию.

При засеве чашек по поверхности агара, вращая тампоном, рисуют букву «Z». После этого образец растирают петлей. Инкубируют при температуре 35°C в очень влажной, обогащенной CO₂ (10%) атмосфере.

N. gonorrheae и N. meningitidis образуют бесцветные и полупрозрачные колонии.

Антибиотик, внесенный в среду в составе ингибирующей добавки, препятствует росту почти всех находящихся в образце непатогенных микроорганизмов, включая сапрофитные виды нейссерий. Среда Тайера-Мартина также подавляет рост Mima polymorpha var. оxidans – микроорганизма, который в некоторых случаях может быть принят за Neisseria gonorrheae.

Пробирки со средой Трансгроу инокулируют, очень осторожно вводя в них тампон по стенке пробирки до самого дна.

Тампон вынимают осторожно, чтобы не допустить утечки CO₂.

Транспортировка:

Если возможно, образец инкубируют при температуре 35°C в течение 12-16 часов перед транспортировкой в лабораторию. Среда Трансгроу сохраняет жизнеспособность нейссерий в течение срока до 48 часов, даже при комнатной температуре. В лаборатории инкубируют пробирки или, если они уже были инкубированы, инспектируют рост.

Среда Трансгроу с 10% CO₂ поддерживает рост патогенных нейссерий и подавляет рост всех сопутствующих микроорганизмов таким же образом, как среда Тайера-Мартина.

Пробирки со средой Трансгроу, если они хорошо закрыты, находятся в атмосфере CO₂ и на холоду, пригодны для использования не менее 3 месяцев после приготовления.

Необходимые добавки

Селективная добавка VCAT (Артикул 06-141-LYO)

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Ванкомицин....................................1,00 мг

Колистина сульфат..........................3,75 мг

Амфотерицин B...............................0,50 мг

Триметоприм …..…...………..........…..….1,50 мг

Дистиллированная вода (Растворитель)

Хранение

Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)

Контроль качества

Температура инкубации:  35°C ± 2,0

Время инкубации: 48 часов

Инокуляция: 10-100 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность). Метод посева: спиральный (ISO 11133-1/2)

Информация для заказа:

Артикул	Упаковка
01-310-500	500 г
06-142LYO1	Селективная добавка VCNT, 10 флаконов
06-144LYO1	Ростовая добавка. 5 флаконов с лиофилизированной добавкой + 5 флаконов растворителя