МакКонки агар с сорбитом

МакКонки агар с сорбитом
MacConkey Sorbitol Agar

Также известно, как SMAC Agar.

Назначение
Селективная и дифференциальная среда для определения энтерогеморрагических Escherichia coli (EHEC O157:H7).

Описание
Замена лактозы сорбитолом для выделения  энтеропатогенных Escherichia coli серотипов 0111 и 055 было предложено в 1952 г. Rappaport и Hening. Полезность среды была показана March и Ratman (1986) и Adams (1991) для выявления, дифференциации и выделения энтерогеморрагических (EHEC) и веротоксин-продуцирующих (VTEC) шт. Е. сoli серотипа O157:H7. Единственная модификация типичной среды МакКонки заключается в замене лактозы на сорбитол. Энтерогеморрагические штаммы не используют этот субстрат и образуют бесцветные колонии. Другие серотипы могут ферментировать сорбитол и, следовательно, образовывать красные колонии. Во всех остальных отношениях, агар МакКонки с сорбитолом работает как остальные среды группы МакКонки. Пептон является источником азота, а хлорид натрия обеспечивает осмолярность. Кристаллический фиолетовый и желчные соли подавляют рост грамположительных бактерий, а нейтральный красный действует как индикатор pH.
Чувствительность SMAC ограничивается трудностью идентификации не ферментирующих сорбитол колоний среди сопутствующей микрофлоры и возможным присутствием других не ферментирующих сорбитол бактерий, таких как Proteus, Aeromonas  и некоторые другие Е. coli, что делает необходимым проведение подтверждающих тестов с колониями.
Zadik et al. (1993) сообщили о дальнейшем улучшении эффективности выделения EHEC 0157  при использовании среды SMAC, обогащенной цефиксимом и теллуритом калия (CT-SMAC). Цефиксим ингибирует Proteus  в концентрации, не подавляющей Escherichia coli. Штаммы EHEC 0157 обычно менее чувствительны к теллуриту, чем многие другие не ферментирующие сорбитол бактерии, такие как Aeromonas, Plesiomonas, Morganella, Providencia и большинство других шт. Е. coli. Применение  цефиксима и теллурита в агаре МакКонки с сорбитолом (CT SMAC) для выделения E. coli O157:H7 описано в «Руководстве по бактериологическому анализу» FDA и одобрено ИСО как предпочтительная селективная среда в стандарте 16654:2001.

Приготовление
Растворить 51,5 г порошка в 1 л дистиллированной воды и довести до кипения. Стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Если среда используется в течение нескольких дней после приготовления, автоклавировать ее нет необходимости, но необходимое прокипятить ее, как минимум 3 минуты.  
После стерилизации, в расплавленную и остывшую до 45-50°C среду можно внести селективную добавку CT SMAC (Артикул 06-146-LYO), рассчитанную на 500 мл агара.

Техника посева
Распределяют инокулят по сухой поверхности среды и инкубируют при температуре 35 ± 2°C в течение 24 часов. Обычно бактерии серотипа O157:H7 образуют бесцветные колонии, а другие штаммы Е. coli образуют колонии красного цвета. Результаты считывают через 24 часа, так как при более продолжительной инкубации интенсивность окрашивания сорбит-ферментирующих колоний уменьшается, а иногда колонии серотипа O157:H7 могут начать ферментировать сорбитол.
Некоторые грамотрицательные бактерии, такие как псевдомонады, протеи и клебсиеллы, могут расти на агаре МакКонки с сорбитолом, но их колонии отличаются и их легко дифференцировать от Е. coli. Из-за неспособности некоторых штаммов неэнтеротоксигенных Е. coli ферментировать сорбитол и образования атипичных колоний некоторыми энтерогеморрагическими штаммами, рекомендовано помимо агара МакКонки с сорбитолом или CT SMAC использовать другие среды. Серологические, биохимические и молекулярные тесты для подтверждения подозрительных колоний также обязательны.

Необходимые добавки:
Селективная добавка CT SMAC (Артикул 06-146-LYO)
Флакон содержит:
Необходимое количество на 500 мл среды.
Цефиксим............................................ 0,025 мг
Калия теллурит...................................  1,250 мг
Дистиллированная вода (Растворитель)

Хранение
Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%).

Контроль качества
Температура инкубации: 35°C ± 2,0
Время инкубации: 24 часа
Инокуляция: 10-100 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность). Метод посева: спиральный (ISO 11133-1/2)
 

Микроорганизм	Рост	Примечание
Enterococcus faecalis ATCC 29212	Подавляется	-
Escherichia coli ATCC 25922	Продуктивность > 0.50	Розово-красные колонии с зоной преципитации
Escherichia coli ATCC 35150 ser 0157 H7	Продуктивность > 0.50	Бесцветные колонии с зоной преципитации

Escherichia coli ATCC 35150           Неинокулированная чашка        Escherichia coli ATCC 25922
            ser 0157 H7                                   (контроль)                             Сорбитол (+)
          Сорбитол (-)

Информация для заказа:
 

Артикул	Упаковка
01-729-005 (MacConkey Sorbitol Agar (Modified) (Mac Conkey)	5 кг
01-729-500 MacConkey Sorbitol Agar (Modified) (Mac Conkey Sorbito Agar) - SMAC Agar	500 кг
01-729BA05 (MacConkey Sorbitol Agar (Modified) (Mac Conkey Sorbitol Agar)	5 саше
06-146LYO1 CT SMAC Selective Supplement	10 флаконов