Бульон с метиловым красным для постановки теста Вогез Проскауэра

Бульон с метиловым красным для постановки теста Вогез Проскауэра

Methyl Red Voges Proskauer Broth

Также известно, как Clarks Lubs Medium

Назначение

Классическая жидкая среда, используемая для учета дифференциальных тестов (Фогес-Проскаур и Метиленовый красный) у энтеробактерий, согласно стандартам ISO и FIL-IDF. 

Описание

Классическая среда Любса и Кларка применяется для выполнения тестов с метиловым красным (МК) и Вогеса-Проскауэра (ФП), которые вместе с индольной и цитратной пробами позволяют провести  дифференциацию колиформных бактерий.

Тест с метиловым красным

Из бактерий, относящихся к классу Enterobacteriaceae, Е. coli ферментируют глюкозу через смешанный кислотный путь, при этом аккумулируются кислые продукты, которые вызывают значительное снижение  исходного pH. Это изменение выявляется с помощью индикатора метилового красного, имеющего  желтый цвет при pН выше 5,1 и красный при рН ниже 4,4.

Тест Вогеса-Проскауэра

Энтеробактерии биотипа Klebsiella-Enterobacter ферментируют глюкозу через 2,3-бутандиоловый путь. Хотя при этом образуются кислые субстанции, конечные продукты преимущественно нейтральные или основные. Из-за этого инкубация должна быть продлена до 3 дней. После этого  реакция с метиленовым красным становится отрицательной. Тем не менее, тест Вогеса-Проскауэра дополняет тест с метиловым красным. Он указывает на образование 2-3-бутандиола и ацетона (эти субстанции с трудом идентифицируются через смешанный кислотный путь). В тесте используется то преимущество, что эти два продукта в щелочных условиях окисляются в диацетил, который вступает в реакцию с гуанидином с образованием окрашенных соединений.

Приготовление

Растворить 17 г порошка в 1 л дистиллированной воды, нагреть до необходимости. Разлить в соответствующие флаконы или пробиркии стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. 

Техника посева

Для выполнения этих тестов используются несколько техник посева. Для примера, одна из них заключается в следующем:

Среду инокулируют чистой культурой исследуемого микроорганизма и инкубируют при температуре 30°C не менее 3 дней, но не более 5 дней. Непосредственно перед считыванием результатов, распределяют культуру на две аликвоты, по одной для каждого теста.

Тест с метиловым красным

Добавляют в культуру 4-5 капель метилового красного (Артикул RE0057) и встряхивают до гомогенизации. Тест считается положительным, если среда становится красной, и отрицательным, если остается желтой.

- Положительный тест (появление красного окрашивания): E.coli, Edwarsiella, Shigella, Salmonella, Citrobacter, Proteus, Klebsiella ozoenae, Klebsiella rhinoscleromatis, Yersinia.

- Отрицательный тест (среда остается желтой): Enterobacter, Hafnia, Serratia, Klebsiella pneumoniae.

- В случае эрвиний эта реакция очень изменчива.

Тест Фогеса-Проскауэра

К среде добавляют реактив Баррита (Артикул RE0100) до появления молочного окрашивания. Затем добавляют реактив O'Меара (Артикул RE0060) до исчезновения  молочного окрашивания. Энергично встряхивают. Тест считается положительным, если среда становится розово-фиолетовой, начиная с кончика пробирки. Если тест отрицательный, цвет не меняется. Относительное количество каждого реактива зависит от исходных объемов среды. Нельзя инкубировать при температуре выше 30°C.

-Положительный тест (розово-красное окрашивание): Enterobacter, Hafnia, Klebsiella pneumoniae, Serratia.

-Отрицательный тест (нет изменения окрашивания): Escherichia, Edwarsiella, Citrobacter, Salmonella, Shigella, Yersinia, Klebsiella ozonae, Klebsiella rhinoscleromatis.

-Эта реакция бессмысленна для протеев и эрвиний, так как она очень вариабельна.

Тест Вогеса-Проскауэра можно поставить очень быстро на очень малых объемах среды и с очень большим инокулятом. Это позволяет сократить время инкубации (18-20 часов), кроме того, считывание результата может быть ускорено нагреванием культуры почти до кипения после добавления реактивов. Однако при использовании этого метода более вероятно получение ошибочных результатов.

Хранение

Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)

Контроль качества

Температура инкубации:  35°C ± 2,0

Время инкубации: 24-48-72 часов

Инокуляция: 1.000-10.000 КОЕ 

Информация для заказа:

Артикул	Упаковка
02-207-500	500 г
02-207BA05	5х500 мл
064-TA0261	20 пробирок по 10 мл