Агар CCA

Агар CCA

Chromogenic Coliform Agar Base

Также известно, как CCA, ACC

Назначение

Плотная, селективная и дифференциальная среда для определения и подсчета общего числа колиформных бактерий и E. coli в образцах воды, с применением метода мембранных фильтров.  

Описание

Сочетанное действие пептона, пирувата и сорбитола обеспечивает быстрый рост колоний в этой среде на основе фосфатного буфера. Среда также обеспечивает простое выделение колиформных бактерий, поврежденных сублетальной термической обработкой. Хлорид натрия поддерживает в среде необходимое для роста осмотическое давление. Селективность отчасти достигается за счет Tergitol^® 7, который подавляет рост грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий, не влияя на колиформы. Селективность усиливается цефсулодином и ванкомицином, которые действуют на псевдомонады и грамотрицательные оксидазоположительные энтерококки и другие грамположительные бактерии.

Дифференциация колоний основана на присутствии в среде хромогенной смеси двух субстратов: 6-хлоро-3-индоксил-p-D-галакто-пиранозида (Salmon^®-GAL) и 5-бромо-4-хлоро-3-индоксил-p-D-глюкуронида (X -Глюкуронид).

Первый расщепляется характерным для колиформ ферментом p-D-галактозидазой и придает колониям колиформ лососево-красное окрашивание.

Вторая хромогенная субстанция расщепляется p-D-глюкуронидазой, специфичной для E. сoli, и придает колониям кишечной палочки синий цвет.

E. coli продуцирует два фермента и расщепляет обе хромогенных субстанции, образуя темно-синие  или фиолетовые колонии. Сумма колоний E. coli плюс колонии лососево-красного цвета составляет общее количество колиформных бактерий.

Другие грамотрицательные бактерии образуют бесцветные колонии, за исключением некоторых, обладающих глюкуронидазной активностью (но не галактозидазной), которые образуют светло-синие  и бирюзовые колонии.

Чтобы убедиться в том, что колонии образованы E. сoli, добавляют небольшое количество триптофана, выявляющего продукцию индола: на сине-фиолетовые колонии наносят каплю  реактива Ковакса (Артикул RE0007). Появление в течение нескольких секунд вишнево-красного окрашивания подтверждает образование индола и, следовательно, присутствие E. coli.

Если хромогенный агар для колиформных бактерий используют для метода мембранной фильтрации, цвет и рост колоний могут меняться в зависимости от характеристик мембранного фильтра. Желательно проводить валидацию используемого типа мембранных фильтров.

Министерство здравоохранения Испании официально одобрило эту среду как альтернативную методологию микробиологического анализа питьевой воды, дав новое определение Escherichia coli ("Энтеробактерия, которая одновременно экспрессирует ферменты p-D-галактозидазу и p-D-глюкуронидазу ") и колиформным бактериям: "Энтеробактерии, которые экспрессируют фермент p-D-галактозидазу».

Приготовление

Развести 29,45 г порошка в 1 л дистиллированной воды и вскипятить до полного растворения. Не автоклавировать, не перегревать. Остудить до 45-50°C и добавить флакон с Селективной добавкой Coliforms CV (Артикул 06-140-LYO) до выделения колиформ. Хорошо смешать и разлить в чашки Петри, избегая образования пузырьков. Разлитый в чашки агар сохранит свою эффективность по меньшей мере в течении месяца при условиях хранения в темном месте и при температуре  2-8°C.

Техника посева

Пробу воды фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм, валидированный по стандарту ISO 7704:1985. Затем мембрану помещают на поверхность среды CCA, не допуская образования пузырьков воздуха между мембраной и поверхностью агара. Чашки Петри с мембраной инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 36 ± 2°C. Если через 18 часов наблюдается рост красных или бесцветных колоний, продлевают инкубацию до 24 часов, чтобы включить поздние реакции p-галактозидазы или p-глюкуронидазы. p-Галактозидазоположительные колонии и p-глюкуронидазоотрицательные колонии (все колонии, окрашенные в лососево-розовый или красный цвет) учитывают как колиформные не –E. сoli бактерии.

Все p-галактозидазоположительные и p-глюкуронидазоположительные колонии (все колонии, окрашенные в темно-синий и фиолетовый цвет) учитывают как E. coli. Общее количество колиформных бактерий складывается из количества розово-красных колоний и темно-синих/фиолетовых. Рассчитывают концентрацию колиформных бактерий и E. coli в 100 мл по исходному объему профильтрованной воды и количеству характерных колоний на мембране. Результаты выражают в количестве колониеобразующих единиц на миллилитр (КОЭ/мл).

Необходимые добавки

Селективная добавка ColiformCV (Артикул 06-140-LYO)

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Цефсулодин ...………………..…….2,50 мг

Ванкомицин....................... 2,50 мг

Дистиллированная вода (Растворитель)

Хранение

Среда предназначена только для использования в лабораториях. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)

Контроль качества

Температура инкубации: 36°C ± 2,0

Время инкубации: 18 - 24 часов

Инокуляция: 10-100 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность). Метод мембранных фильтров.

Информация для заказа:

Артикул	Упаковка
01-695-500	500 г
01-695BA05	5х500 мл
064-PF1015	30 чашек Ø 55 мм
06-140LYO1	селективная добавка Coliforms CV, 10 флаконов