Агар BCYE для легионелл

 Агар BCYE для легионелл 

Legionella BCYE Agar Base  

Также известно, как CYE 

Назначение

Плотная основа среды, используемая для выделения и подсчета Legionella из H₂O, согласно стандартам ISO 11731:1998 и 11731-2:2004.

Описание

Фактический состав этой среды соответствует стандартам ISO 11731 и 11731-2, но агар  BCYE основан на модификации ранее описанной среды. В 1979 г. Feeley с сотрудниками описали угольно-дрожжевой агар (CYE) как модификацию агара F-G. Они заменили крахмал в составе агара F-G активированным углем, а дрожжевой экстракт на казеиновый гидролизат, что способствует лучшему выделению Legionella pneumophila. Pasculle в 1980 году сообщил, что агар CYE может быть улучшен добавлением буфера ACES, а год спустя  Edelstein повысил чувствительность среды добавлением cc-кетоглютарата (агар BCYE). Среда состоит из основы, обогащенной ростовыми факторами (агар BCYE), и селективной среды, обогащенной ингибиторами сопутствующей микрофлоры. Дрожжевой экстракт обеспечивает основными питательными веществами, так как среда не содержит ферментируемых углеводов. L-Цистеин, железа пирофосфат и a-кетоглютарат введены в состав среды для удовлетворения питательных потребностей видов Legionella.

Активированный уголь  разлагает перекись водорода – токсичный продукт метаболизма, и также может адсорбировать CO₂ и модифицировать поверхностное натяжение. Добавление буфера помогает поддерживать нужное pН для оптимального роста. Селективность повышается за счет добавления ванкомицина и полимиксина В, которые подавляют грамположительные бактерии, и циклогексимида или натамицина, которые являются фунгицидами и подавляют рост дрожжей.

Приготовление

Развести 13,5 г порошка в 500 мл дистиллированной воды и доводят до кипения и полного растворения. Стерилизуют путем автоклавирования при 121°C в течение 15 минут. Охлаждают до 47-50°C и добавляют с соблюдением правил асептики растворенный флакон с ростовой добавкой для Legionella BCYE (Артикул 06-137-LYO). Осторожно смешивают и разливают по чашкам Петри. Если требуется селективная среда для Legionella, ее можно получить путем добавления флакона с селективной добавкой для Legionella GVPC (Артикул 06-138-LYO) к 500 мл к среде BCYE, расплавленной и охлажденной до 47-50°C.

Если требуется контрольная среда BCYE – Cys, ее можно получить  путем добавления флакона ростовой добавки Legionella BCYE с цистеином (Артикул 06-134-LYO) в стерильную, расплавленную и охлажденную агаровую основу  для легионелл BCYE.

Техника посева

Для получения отдельных колоний из проб и образцов выполняют процедуры ISO 11731 и 11731-2 или другие стандартные процедуры. Инокулированные чашки оставляют до полного впитывания инокулята. Чашки инкубируют в перевернутом состоянии при температуре 36 ± 1°C в течение срока до 10 дней. Чтобы обеспечить в инкубаторе влажную атмосферу, на дно инкубатора ставят поднос с водой. В поднос доливают свежую воду (при необходимости) каждый раз, когда производится инспекция чашек. Инкубация в атмосфере воздуха с 2,5% (объемная фракция) CO₂ может способствовать росту некоторых легионелл, но это несущественно.

Инспектируют чашки с использованием чашечного микроскопа не менее трех раз с интервалом в 2-4 дня за 10 дней инкубации, так как легионеллы растут медленно и их рост может маскироваться ростом других микроорганизмов. Подсчитывают количество колоний всех типов.

Колонии Legionella часто окрашены в бело-серо-сине-фиолетовый цвет, но могут быть коричневыми, розовыми, известково-зелеными или темно-красными. Имеют гладкую поверхность с ровными краями, характерный вид матового стекла. Под ультрафиолетовым светом некоторые колонии светятся бриллиантово-белым светом (явление автофлуоресценции), другие красным, а L. pneumophila имеют тускло-зеленый цвет с желтоватым оттенком. Все подозрительные колонии должны быть подтверждены культуральными, биохимическими, серологическими или генетическими методами.

Необходимые добавки

Добавка Legionella BCYE (артикул 06-137-LYO)

Селективная добавка Legionella GVPC (артикул 06-138-LYO)

Добавка Legionella BCYE без цистеина (артикул 06-134-LYO)

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Хранение

Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%).

Контроль качества

Температура инкубации:  35°C ± 2,0

Время инкубации: 3 – 10 дней

Инокуляция: 150-300 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность). Метод посева: спиральный (ISO11133-1/2).

Артикул	Упаковка
01-687-500	500 г
01-687BA05	5х500 мл
064-PA0069	BCYE Legionella Agar Base, 20 чашек Ø 90 мм
064-PA6001	BCYE Legionella without Cysteine, 20 чашек Ø 90 мм
064-PA0017	Legionella Selective (GVPC) Agar (ISO), 20 чашек Ø 90 мм
06-137LYO1	добавка Legionella BCYE, 5 флаконов + 5 флаконов с растворителем
06-138LYO1	Селективная добавка Legionella GVPC, 10 флаконов
06-134LYO1	Добавка Legionella BCYE без цистеина, 5 флаконов + 5 флаконов с растворителем